Histochemical and Immunotechniques MCQ Quiz in हिन्दी - Objective Question with Answer for Histochemical and Immunotechniques - मुफ्त [PDF] डाउनलोड करें

सही उत्तर एलेक्सा 488 (C) और Cy5 (D) है।

अवधारणा:

फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी कोशिका आकारिकी, कोशिकीय/उपकोशिकीय डिब्बों के साथ-साथ रोग (जैसे, कैंसर बनाम सामान्य कोशिकाएँ) या फेनोटाइप (जैसे, स्टेम सेल वंश) के कोशिकीय चिन्हकों की कल्पना करने में सहायता करता है।

• वाइड-फील्ड फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी (WFM) में एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (आमतौर पर पराबैंगनी या दृश्यमान स्पेक्ट्रम के नीले, हरे क्षेत्रों में) का प्रकाश एक आर्क-डिस्चार्ज लैंप या अन्य स्रोत से बहु-स्पेक्ट्रल प्रकाश को एक तरंग दैर्ध्य-चयनात्मक बैंडपास फ़िल्टर (उत्तेजना फ़िल्टर) से गुजारकर उत्पन्न होता है।
• उत्तेजना फ़िल्टर द्वारा पारित चयनित तरंग दैर्ध्य को तब एक डाइक्रोमैटिक मिरर या बीम स्प्लिटर से परावर्तित किया जाता है, जो नमूने को तीव्र प्रकाश के साथ उजागर करने के लिए माइक्रोस्कोप ऑब्जेक्ट के माध्यम से गुजरता है।
• यदि नमूना फ्लोरोसेंस करता है, तो ऑब्जेक्ट द्वारा एकत्रित उत्सर्जन प्रकाश डाइक्रोमैटिक मिरर के माध्यम से वापस गुजरता है और बाद में एक अन्य बैंडपास फ़िल्टर (उत्सर्जन फ़िल्टर) द्वारा फ़िल्टर किया जाता है, जो अवांछित उत्तेजना तरंग दैर्ध्य को अवरुद्ध करता है।
• उत्सर्जित प्रकाश को तब एक डिटेक्टर जैसे CCD कैमरे द्वारा एकत्र किया जाता है।

व्याख्या:

कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप में सह-स्थानीयकरण का निरीक्षण करने के लिए, शोधकर्ता को अलग-अलग तरंगदैर्घ्य पर प्रकाश उत्सर्जित करने वाले फ्लोरोफोर का चयन करने की आवश्यकता होती है, यह सुनिश्चित करते हुए कि उनके उत्सर्जन स्पेक्ट्रम में बहुत अधिक ओवरलैप न हो। इससे दोनों प्रोटीनों का स्पष्ट विभेदन और एक साथ इमेजिंग संभव हो पाती है।

A. एलेक्सा 594 - लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~590 nm, उत्सर्जन शिखर ~617 nm)
B. TRITC - लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~557 nm, उत्सर्जन शिखर ~576 nm)
C. एलेक्सा 488 - हरे फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~488 nm, उत्सर्जन शिखर ~519 nm)
D. Cy5 - दूर-लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~649 nm, उत्सर्जन शिखर ~670 nm)

• एलेक्सा 488: लगभग 519 nm के उत्सर्जन शिखर के साथ हरे फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है। यह स्पेक्ट्रम के हरे क्षेत्र में अच्छी तरह से आता है।
• Cy5: लगभग 670 nm के उत्सर्जन शिखर के साथ दूर-लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है। यह स्पेक्ट्रम के लाल क्षेत्र में बहुत दूर है, लगभग दृश्य प्रकाश सीमा के किनारे पर।

इन फ्लोरोफोर्स में उत्सर्जन शिखर अच्छी तरह से अलग होते हैं, एलेक्सा 488 हरे रंग की सीमा में और Cy5 दूर-लाल सीमा में। उनके उत्सर्जन स्पेक्ट्रा में यह महत्वपूर्ण पृथक्करण ओवरलैप की संभावना को कम करता है, जिससे दोनों प्रोटीनों की स्पष्ट और अलग इमेजिंग संभव हो पाती है।

सही उत्तर A, B, D, F है।

व्याख्या:

कथन A: यह प्रोटीन, पेप्टाइड्स, प्रतिरक्षी और हार्मोन जैसे घुलनशील पदार्थों का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने के लिए एक अत्यधिक संवेदनशील तकनीक है।

• ELISA विभिन्न घुलनशील पदार्थों का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने में अपनी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के लिए जाना जाता है। इसका व्यापक रूप से अनुसंधान और नैदानिक निदान में नमूनों में प्रोटीन, पेप्टाइड्स, प्रतिरक्षी और हार्मोन की सांद्रता को मापने के लिए उपयोग किया जाता है।

कथन B: यह एंजाइमों से चिह्नित प्रतिरक्षी का उपयोग करता है जो क्रियाधार जोड़ने पर एक मापनीय उत्पाद उत्पन्न करते हैं।

• ELISA में, प्रतिरक्षी एंजाइमों से संयुग्मित होते हैं। जब एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षी अपने लक्ष्य प्रतिजन से बंध जाता है, और एंजाइम के लिए एक विशिष्ट क्रियाधार जोड़ा जाता है, तो एक उत्प्रेरक अभिक्रिया होती है, जिससे एक पता लगाने योग्य संकेत (अक्सर रंग परिवर्तन) उत्पन्न होता है। यह संकेत प्रतिजन की उपस्थिति और मात्रा को इंगित करता है।

कथन C: इस तकनीक में बंधे और मुक्त प्रतिजन को अलग करने की आवश्यकता नहीं होती है।

• यह कथन गलत है। ELISA में बंधे हुए और मुक्त प्रतिजन को अलग करने के लिए कई धुलाई चरण शामिल हैं। ये धुलाई चरण सुनिश्चित करते हैं कि केवल प्रतिजन-प्रतिरक्षी कॉम्प्लेक्स प्लेट पर रहते हैं, जिन्हें परख के अंतिम चरणों में पता लगाया जाता है।

कथन D: ELISA में रंग परिवर्तन लक्ष्य विश्लेषण की उपस्थिति को इंगित करता है।

• ELISA में रंग (या किसी अन्य पता लगाने योग्य संकेत) का उत्पादन एंजाइम-क्रियाधार अभिक्रिया का प्रत्यक्ष परिणाम है, जो केवल तभी होता है जब एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षी अपने लक्ष्य प्रतिजन से बंध गया हो। इस प्रकार, रंग की उपस्थिति नमूने में लक्ष्य विश्लेषण की उपस्थिति को इंगित करती है।

कथन E: ELISA में मोनोक्लोनल प्रतिरक्षी का उपयोग करना संभव नहीं है।

• यह कथन गलत है। मोनोक्लोनल प्रतिरक्षी, जो कोशिकाओं के एकल क्लोन से प्राप्त प्रतिरक्षी हैं और इस प्रकार संरचना और प्रतिजन विशिष्टता में समान हैं, आमतौर पर ELISA में उपयोग किए जाते हैं। उनकी उच्च विशिष्टता और एकरूपता उन्हें इस तकनीक के लिए आदर्श बनाती है।

कथन F: रंग परिवर्तन की तीव्रता लक्ष्य विश्लेषण की सांद्रता के सीधे आनुपातिक होती है।

• ELISA में, एंजाइम अभिक्रिया एक रंग परिवर्तन उत्पन्न करती है जिसकी तीव्रता स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापी जाती है। उत्पादित रंग की मात्रा नमूने में प्रतिजन की मात्रा के समानुपाती होती है। इसलिए, एक मानक वक्र से रंग की तीव्रता की तुलना करके, लक्ष्य विश्लेषण की सांद्रता को सटीक रूप से निर्धारित किया जा सकता है।

सही उत्तर केवल C है।

व्याख्या:

A. जैव-पहचान प्रक्रियाओं के दो वर्ग हैं - जैव-संबद्धता पहचान और जैव-उत्प्रेरकीय पहचान।

• यह कथन सही है। बायोसेंसर्स आमतौर पर दो मुख्य प्रकार की जैविक अंतःक्रियाओं पर निर्भर करते हैं:
• जैव-संबद्धता पहचान: इसमें ग्राही के लिए एक विश्लेषण का विशिष्ट बंधन शामिल है (जैसे, प्रतिरक्षी-प्रतिजन अंतःक्रिया, डीएनए-डीएनए संकरण)।
• जैव-उत्प्रेरकीय पहचान: इसमें एंजाइम द्वारा एक रासायनिक प्रतिक्रिया की उत्प्रेरणा शामिल है, जहाँ विश्लेषण को एक उत्पाद में परिवर्तित किया जाता है।

B. दोनों प्रक्रियाओं में ग्राही के साथ विश्लेषण का चयनात्मक बंधन शामिल है।

• यह कथन भी सही है।
• जैव-संबद्धता पहचान में, प्रक्रिया में ग्राही (जैसे प्रतिरक्षी, न्यूक्लिक अम्ल, या अन्य जैव अणु) के लिए एक विश्लेषण का चयनात्मक बंधन शामिल है।
• जैव-उत्प्रेरकीय पहचान में, चयनात्मकता एंजाइम की विशिष्ट क्रियाधार (विश्लेषण) को बांधने और इसके रूपांतरण को उत्प्रेरित करने की क्षमता में निहित है।

C. जैव-संबद्धता पहचान में, बंधन बहुत कमजोर होता है और ट्रांसड्यूसर बंधे ग्राही-विश्लेषण युग्म की उपस्थिति का पता लगाता है।

• यह कथन गलत है। जैव-संबद्धता पहचान आमतौर पर कमजोर लोगों के बजाय मजबूत और विशिष्ट अंतःक्रिया पर निर्भर करती है।
• उदाहरणों में प्रतिरक्षी और प्रतिजन के बीच उच्च-संबद्धता बंधन, या डीएनए-डीएनए संकरण शामिल हैं। ट्रांसड्यूसर बंधे ग्राही-विश्लेषण युग्म की उपस्थिति का पता लगाता है, लेकिन जैव-संबद्धता पहचान में बंधन की ताकत आमतौर पर मजबूत और बहुत विशिष्ट होती है।

D. जैव उत्प्रेरकीय पहचान में, उत्पाद अणुओं को बनाने के लिए विश्लेष्य पदार्थों को रासायनिक रूप से परिवर्तित किया जाता है।

• यह कथन सही है। जैव-उत्प्रेरकीय पहचान में, एंजाइम विश्लेषण (क्रियाधार) को विभिन्न उत्पाद अणुओं में परिवर्तित करने की उत्प्रेरणा करते हैं। यह परिवर्तन वह है जिसे ट्रांसड्यूसर पता लगाता है और मापता है।

E. एक बायोसेंसर का एक और महत्वपूर्ण हिस्सा ट्रांसड्यूसर है। यह जैव-पहचान घटना के साथ होने वाले भौतिक और रासायनिक परिवर्तन को मापने योग्य विद्युत संकेतों में बदल देता है।

• यह कथन भी सही है। ट्रांसड्यूसर एक बायोसेंसर का एक महत्वपूर्ण घटक है। यह जैव-पहचान घटना के परिणामस्वरूप होने वाले भौतिक या रासायनिक परिवर्तनों को एक मापने योग्य संकेत में परिवर्तित करता है, जो अक्सर विद्युत प्रकृति का होता है। यह मापने योग्य संकेत सेंसर का डेटा आउटपुट प्रदान करता है।

सही उत्तर विकल्प 4 है अर्थात मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोपो के विरूद्ध एकक्लोनी प्रग्रहण तथा संसूचन प्रतिरक्षीयों के साथ सैंडविच ELISA।

Key Points

सैंडविच ELISA

• इस दृष्टिकोण में सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट एसे (ELISA) सेटअप का उपयोग किया जाता है, जहां दो अलग-अलग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है: एक IL-17a को पकड़ने के लिए और दूसरा इसका पता लगाने के लिए।
• ये एंटीबॉडी IL-17a प्रोटीन अणु पर विभिन्न एपिटोप्स (विशिष्ट बंधन स्थलों) से बंधने के लिए निर्मित किए गए हैं।
• यह दृष्टिकोण सटीक क्यों है, आइए जानें:

1. उन्नत विशिष्टता:
   • IL-17a के विभिन्न एपिटोप्स को पहचानने वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से परख की विशिष्टता बढ़ जाती है।
   • यह दोहरी एंटीबॉडी बंधन यह सुनिश्चित करता है कि पता लगाया गया संकेत वास्तव में लक्ष्य प्रोटीन से है और अन्य अणुओं से हस्तक्षेप को न्यूनतम करता है।
2. पृष्ठभूमि शोर कम:
   • IL-7A अणु के विभिन्न क्षेत्रों को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी का उपयोग करके, गैर-विशिष्ट बंधन के कारण होने वाले पृष्ठभूमि शोर को कम किया जाता है, जिससे माप की सटीकता बढ़ जाती है।
3. परिमाणीकरण:
   • IL-7A की ज्ञात सांद्रता वाले मानक वक्रों के उपयोग से रोगी के नमूनों में लक्ष्य प्रोटीन की सटीक मात्रा का पता लगाना संभव हो जाता है।
   • उत्पन्न संकेत उपस्थित IL-17a की सांद्रता के सीधे आनुपातिक होते हैं।
4. पुनरुत्पाद्यता:
   • सैंडविच ELISA एक अच्छी तरह से स्थापित तकनीक है जिसमें उच्च पुनरुत्पादकता है, जो इसे नैदानिक सेटिंग्स के लिए उपयुक्त बनाती है जहां सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम आवश्यक हैं।
5. संवेदनशीलता:
   • दो मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के संयोजन से परख की संवेदनशीलता बढ़ जाती है, जिससे IL-17a की कम सांद्रता का पता लगाना संभव हो जाता है।
6. सत्यापन:
   • विभिन्न एपिटोप्स के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का प्रयोग करने से परिणामों में विश्वास बढ़ता है, क्योंकि लक्ष्य प्रोटीन को स्वतंत्र बंधन स्थलों का उपयोग करके पकड़ा और पता लगाया जाता है।

इसके विपरीत, अन्य विकल्पों की कुछ सीमाएँ हैं:

विकल्प 1: समान एपिटोप के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से हस्तक्षेप और अवास्तविक सकारात्मकता की संभावना बढ़ सकती है।

विकल्प 2: SDS-PAGE और वेस्टर्न ब्लॉटिंग गुणात्मक हो सकते हैं और उचित नियंत्रण और मानकों के बिना सटीक मात्रात्मक डेटा प्रदान नहीं कर सकते हैं।

विकल्प 3: पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के साथ प्रत्यक्ष ELISA में सैंडविच ELISA की विशिष्टता का अभाव होता है और गैर-विशिष्ट बंधन के कारण गलत परिणाम हो सकते हैं।

सैंडविच ELISA तकनीक का इस्तेमाल आमतौर पर जैविक नमूनों में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इसमें लक्ष्य प्रोटीन को पकड़ने और उसका पता लगाने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया जाता है। IL-17 मात्रा निर्धारण के मामले में, सैंडविच ELISA में मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोप्स के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग अन्य तरीकों की तुलना में अधिक विशिष्टता और संवेदनशीलता प्रदान करता है।

सही उत्तर विकल्प 4 यानी लैब तकनीशियन 4 है।

व्याख्या-

लैब तकनीशियन 4 की जांच से इंटरफेरॉन γ के लिए सही ELISPOT परिणाम मिलने की संभावना है।

• ELISPOT (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोस्पॉट जांच) एक तकनीक है जिसका उपयोग कोशिकाओं द्वारा स्रावित विशिष्ट प्रोटीन, जैसे इंटरफेरॉन γ (IFNγ), की उपस्थिति का पता लगाने के लिए किया जाता है। इस मामले में, लक्ष्य TB-विशिष्ट प्रतिजन की प्रतिक्रिया में कोशिकाओं द्वारा IFNγ स्राव का पता लगाना है।
• लैब तकनीशियन 4 ने प्रत्येक कुंडी को 250,000 कोशिकाओं के साथ लेपित किया और कोशिकाओं को TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त किया। यह दृष्टिकोण यह सुनिश्चित करता है कि कोशिकाएं TB-विशिष्ट प्रतिजन के संपर्क में हैं, जो इन प्रतिजन को पहचानने वाली कोशिकाओं द्वारा IFNγ स्राव को ट्रिगर करना चाहिए।
• प्रत्येक कुंडी को कोशिकाओं के साथ लेपित करके और उन्हें TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त करके, लैब तकनीशियन 4 का जांच IFNγ-उत्पादक कोशिकाओं का सटीक पता लगाने की सबसे अधिक संभावना है।

अन्य दृष्टिकोणों में संभावित समस्याएं हैं:

• लैब तकनीशियन 1 के दृष्टिकोण में कुंडियों को फॉर्मेलडिहाइड-उपचारित कोशिकाओं के साथ लेपित करना और उन्हें TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त करना शामिल है। हालांकि, फॉर्मेलडिहाइड उपचार कोशिका व्यवहार्यता को प्रभावित कर सकता है और कोशिकीय प्रतिक्रियाओं में हस्तक्षेप कर सकता है, जिससे अविश्वसनीय परिणाम हो सकते हैं।
• लैब तकनीशियन 2 के दृष्टिकोण में कोशिकाओं को TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त करना शामिल नहीं है, इसलिए यह प्रतिजन-विशिष्ट कोशिकाओं द्वारा IFNγ स्राव को प्रभावी ढंग से प्रेरित नहीं कर सकता है।
• लैब तकनीशियन 3 के दृष्टिकोण में कुंडियों को लेपित करने और उन्हें TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त करने से पहले PBMCs से T कोशिकाओं को समाप्त करना और मोनोसाइट्स के लिए समृद्ध करना शामिल है। जबकि यह दृष्टिकोण मोनोसाइट्स के लिए समृद्ध हो सकता है, यह T कोशिकाओं को समाप्त करता है, जो प्रतिजन की प्रतिक्रिया में IFNγ के प्रमुख उत्पादक हैं। इसलिए, यह दृष्टिकोण TB-विशिष्ट प्रतिजन के प्रति IFNγ प्रतिक्रिया को सटीक रूप से प्रतिबिंबित नहीं कर सकता है।

निष्कर्ष-
कुल मिलाकर, लैब तकनीशियन 4 का कुंडियों को कोशिकाओं के साथ लेपित करने और उन्हें TB-विशिष्ट प्रतिजन के साथ उद्दीप्त करने का दृष्टिकोण TB प्रतिजन के जवाब में IFNγ स्राव का पता लगाने के लिए सबसे उपयुक्त है।

अवधारणा:

• विडाल परीक्षण का उपयोग नैदानिक प्रयोगशालाओं में आंतरिक बुखार (टाइफाइडल या पैराटाइफाइडल बुखार) के सीरोलॉजिकल निदान के लिए व्यापक रूप से किया जाता है।
• साल्मोनेला टाइफी के O और H प्रतिजन तथा साल्मोनेला पैराटाइफी के A, B, और C प्रतिजन इस परख के लक्ष्य हैं, जो सीरम प्रतिरक्षी के स्तर का आकलन करते हैं।
• O और H प्रतिजन क्रमशः साल्मोनेला टाइफी में कोशिका भित्ति और कशाभिका पर मौजूद होते हैं।
• जबकि AH और BH प्रतिजन साल्मोनेला पैराटाइफी के फ्लैजिला पर मौजूद होते हैं।
• इस परीक्षण में, साल्मोनेला पैराटाइफी के O प्रतिजन का उपयोग नहीं किया जाता है क्योंकि वे साल्मोनेला टाइफी के O प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं ।
• ये प्रतिजन प्रतिरक्षाजनक होते हैं, जिसका अर्थ है कि जब वे पोषी के प्रतिरक्षा तंत्र के समक्ष प्रस्तुत किये जाते हैं, तो वे विशेष प्रतिरक्षी का विकास करते हैं।
• साल्मोनेला प्रतिरक्षी का सीरम स्तर पहले सप्ताह के अंत में दिखना शुरू होता है और स्थानिक बुखार के तीसरे सप्ताह के दौरान तेजी से बढ़ता है। तीव्र टाइफाइड बुखार में O एग्लूटीनिन आमतौर पर बीमारी की शुरुआत के 6-8 दिन बाद और H एग्लूटीनिन 10-12 दिन बाद देखा जा सकता है।
• बढ़ते प्रतिरक्षी टाइटर को दिखाने के लिए, 7-10 दिनों के अंतराल पर दो सीरा नमूनों का विश्लेषण करना उचित है।
• स्लाइड और ट्यूब प्रक्रिया को साल्मोनेला प्रतिजन निलंबन के साथ नियोजित किया जा सकता है।

स्पष्टीकरण:

विकल्प 1 : अवक्षेपण परीक्षण

• अवक्षेपण एक अभिक्रिया है जो विलयन में उपस्थित आयनों (आयनिक यौगिकों) के बीच रासायनिक अभिक्रिया से अघुलनशील ठोस द्रव्य के निर्माण की ओर ले जाती है।
• विडाल परीक्षण में, अघुलनशील ठोस मोआ आयन प्रतिक्रिया का परिणाम नहीं हैं।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

विकल्प 2 : एग्लूटिनेशन परीक्षण

• समूहन एक अभिक्रिया है जो विलयन में निलंबित कणों के एकत्रीकरण से ठोस द्रव्य के निर्माण की ओर ले जाती है।
• विडाल परीक्षण में, निलंबित कण प्रतिजन और प्रतिरक्षी होते हैं जो ठोस पदार्थ के निर्माण का कारण बनते हैं।
• अतः यह सही विकल्प है।

विकल्प 3 : पूरक स्थिरीकरण परीक्षण

• पूरक स्थिरीकरण परीक्षण, परीक्षण नमूने में उपस्थित Ag-Ab कॉम्प्लेक्स को निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले सबसे महत्वपूर्ण परीक्षणों में से एक है।
• पूरक अणु अकेले प्रतिजन या प्रतिरक्षी से बंध नहीं सकते, वे केवल Ag-Ab कॉम्प्लेक्स से ही बंध सकते हैं। एक बार, यह कॉम्प्लेक्स से बंध जाता है, पूरक स्थिर हो जाता है और आगे की प्रतिक्रिया शुरू हो जाती है।
• विडाल परीक्षण में, हम Ag-Ab कॉम्प्लेक्स से जुड़ने के लिए किसी पूरक का उपयोग नहीं करते हैं।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

विकल्प 4: प्रतिरक्षाप्रतिदीप्ति संसूचन

• इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक महत्वपूर्ण इम्यूनोकेमिकल तकनीक है जो विभिन्न कोशिका निर्माण के ऊतकों में प्रतिजन के स्थानीयकरण और पता लगाने की अनुमति देती है।
• इस प्रक्रिया में प्रतिरक्षी को फ्लोरोफोरस के साथ टैग किया जाता है।
• विडाल परीक्षण में, प्रतिजन का पता लगाने के लिए फ्लोरोफोर प्रतिरक्षी का उपयोग नहीं किया जाता है।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

अतः सही उत्तर विकल्प 2 अर्थात समूहन अभिक्रिया है।

सही उत्तर विकल्प 4 है अर्थात मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोपो के विरूद्ध एकक्लोनी प्रग्रहण तथा संसूचन प्रतिरक्षीयों के साथ सैंडविच ELISA।

Key Points

सैंडविच ELISA

• इस दृष्टिकोण में सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसोर्बेंट एसे (ELISA) सेटअप का उपयोग किया जाता है, जहां दो अलग-अलग मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है: एक IL-17a को पकड़ने के लिए और दूसरा इसका पता लगाने के लिए।
• ये एंटीबॉडी IL-17a प्रोटीन अणु पर विभिन्न एपिटोप्स (विशिष्ट बंधन स्थलों) से बंधने के लिए निर्मित किए गए हैं।
• यह दृष्टिकोण सटीक क्यों है, आइए जानें:

1. उन्नत विशिष्टता:
   • IL-17a के विभिन्न एपिटोप्स को पहचानने वाले मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से परख की विशिष्टता बढ़ जाती है।
   • यह दोहरी एंटीबॉडी बंधन यह सुनिश्चित करता है कि पता लगाया गया संकेत वास्तव में लक्ष्य प्रोटीन से है और अन्य अणुओं से हस्तक्षेप को न्यूनतम करता है।
2. पृष्ठभूमि शोर कम:
   • IL-7A अणु के विभिन्न क्षेत्रों को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी का उपयोग करके, गैर-विशिष्ट बंधन के कारण होने वाले पृष्ठभूमि शोर को कम किया जाता है, जिससे माप की सटीकता बढ़ जाती है।
3. परिमाणीकरण:
   • IL-7A की ज्ञात सांद्रता वाले मानक वक्रों के उपयोग से रोगी के नमूनों में लक्ष्य प्रोटीन की सटीक मात्रा का पता लगाना संभव हो जाता है।
   • उत्पन्न संकेत उपस्थित IL-17a की सांद्रता के सीधे आनुपातिक होते हैं।
4. पुनरुत्पाद्यता:
   • सैंडविच ELISA एक अच्छी तरह से स्थापित तकनीक है जिसमें उच्च पुनरुत्पादकता है, जो इसे नैदानिक सेटिंग्स के लिए उपयुक्त बनाती है जहां सुसंगत और विश्वसनीय परिणाम आवश्यक हैं।
5. संवेदनशीलता:
   • दो मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के संयोजन से परख की संवेदनशीलता बढ़ जाती है, जिससे IL-17a की कम सांद्रता का पता लगाना संभव हो जाता है।
6. सत्यापन:
   • विभिन्न एपिटोप्स के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का प्रयोग करने से परिणामों में विश्वास बढ़ता है, क्योंकि लक्ष्य प्रोटीन को स्वतंत्र बंधन स्थलों का उपयोग करके पकड़ा और पता लगाया जाता है।

इसके विपरीत, अन्य विकल्पों की कुछ सीमाएँ हैं:

विकल्प 1: समान एपिटोप के विरुद्ध मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करने से हस्तक्षेप और अवास्तविक सकारात्मकता की संभावना बढ़ सकती है।

विकल्प 2: SDS-PAGE और वेस्टर्न ब्लॉटिंग गुणात्मक हो सकते हैं और उचित नियंत्रण और मानकों के बिना सटीक मात्रात्मक डेटा प्रदान नहीं कर सकते हैं।

विकल्प 3: पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी के साथ प्रत्यक्ष ELISA में सैंडविच ELISA की विशिष्टता का अभाव होता है और गैर-विशिष्ट बंधन के कारण गलत परिणाम हो सकते हैं।

सैंडविच ELISA तकनीक का इस्तेमाल आमतौर पर जैविक नमूनों में प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इसमें लक्ष्य प्रोटीन को पकड़ने और उसका पता लगाने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया जाता है। IL-17 मात्रा निर्धारण के मामले में, सैंडविच ELISA में मानव IL-17 के विभिन्न एपिटोप्स के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग अन्य तरीकों की तुलना में अधिक विशिष्टता और संवेदनशीलता प्रदान करता है।

Key Points 

• ELISA, या एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख, इम्यूनोलॉजी और बायोकेमिस्ट्री में एंटीजन, प्रतिरक्षी और हार्मोन जैसे विशिष्ट अणुओं का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सामान्यतः उपयोग की जाने वाली तकनीक है।
• ELISA में, रुचि का एंटीजन या प्रतिरक्षी एक ठोस सतह पर स्थिर किया जाता है, जैसे कि माइक्रोटिटर प्लेट या झिल्ली।
• फिर, एक विशिष्ट प्रतिरक्षी जो एक एंजाइम से जुड़ी होती है, जोड़ा जाता है, जो स्थिर एंटीजन या प्रतिरक्षी से जुड़कर एक प्रतिरक्षी-एंटीजन कॉम्प्लेक्स बनाता है।
• एंजाइम-लिंक्ड प्रतिरक्षी आमतौर पर सहसंयोजक बंधों द्वारा स्थिर होता है।
• यह सहसंयोजी आबन्ध प्रतिरक्षी के लिए एंजाइम का एक स्थिर और स्थायी लगाव सुनिश्चित करता है, जो रुचि के एंटीजन का सटीक पता लगाने की अनुमति देता है।
• सहसंयोजक लगाव की एक विधि ग्लूटारएल्डिहाइड या फॉर्मेलडिहाइड जैसे क्रॉस-लिंकिंग एजेंटों के उपयोग के माध्यम से है, जो एंजाइम और प्रतिरक्षी के बीच एक स्थिर सहसंयोजी आबन्ध बना सकते हैं।
• एक अन्य विधि आनुवंशिक रूप से इंजीनियर फ्यूजन प्रोटीन के उपयोग के माध्यम से है, जहाँ एंजाइम और प्रतिरक्षी को एक ही प्रोटीन में एक साथ जोड़ा जाता है।
• एक बार जब एंजाइम-लिंक्ड प्रतिरक्षी को परख में जोड़ा जाता है, तो यह विशिष्ट रूप से एंटीजन से जुड़ जाएगा यदि मौजूद हो, एक एंटीजन-प्रतिरक्षी कॉम्प्लेक्स बनाता है।
• प्रतिरक्षी से जुड़ा एंजाइम तब एक क्रियाधार को एक पता लगाने योग्य सिग्नल में बदल देगा, जो एंटीजन की उपस्थिति का संकेत देता है।
• ELISA में आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले एंजाइमों में हॉर्सराडिश पेरोक्सीडेस, क्षारीय फॉस्फेटेस और β-गैलेक्टोसिडेस शामिल हैं, जो रंगहीन क्रियाधार को रंगीन उत्पादों या फ्लोरोसेंट क्रियाधार को फ्लोरोसेंट उत्पादों में बदल सकते हैं।
• एंजाइम द्वारा उत्पन्न सिग्नल को तब एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, फ्लोरोमीटर या किसी अन्य पता लगाने वाले उपकरण द्वारा मापा जाता है, जिससे रुचि के एंटीजन या प्रतिरक्षी की मात्रा निर्धारित की जा सकती है।
• ELISA में अन्य इम्यूनोसे तकनीकों पर कई फायदे हैं, जिसमें उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता, एक विस्तृत गतिशील सीमा और एक साथ बड़ी संख्या में नमूनों का विश्लेषण करने की क्षमता शामिल है।
• ELISA का उपयोग आमतौर पर अनुसंधान, नैदानिक निदान और खाद्य और पेय पदार्थ, फार्मास्यूटिकल्स और पर्यावरण निगरानी जैसे उद्योगों में गुणवत्ता नियंत्रण में किया जाता है।

इसलिए, विकल्प 3 अर्थात् सहसंयोजी आबन्ध सही उत्तर है।

Mistake Points

• आधिकारिक उत्तर कुंजी विकल्प 2 और 3 दोनों को सही बताती है क्योंकि दिए गए दोनों विकल्प समान हैं।
• हालांकि, हिंदी अनुभाग में दिए गए विकल्पों को ध्यान में रखते हुए, विकल्प 2 सही उत्तर होना चाहिए।

Key Points 

विकल्प 1: प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी: रंजको का प्रयोग जो कि समान तरंगदैर्ध्य के प्रकाश का अवशोषण तथा उत्सर्जन करते है

• प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी एक प्रकार का सूक्ष्मदर्शी है जो प्रतिदीप्ति का उपयोग करके नमूने की छवि उत्पन्न करता है।
• प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में, एक प्रतिदीप्ति रंग या प्रोटीन का उपयोग नमूने में विशिष्ट संरचनाओं या अणुओं को चिह्नित करने के लिए किया जाता है।
• रंग या प्रोटीन एक तरंग दैर्ध्य पर प्रकाश को अवशोषित करता है और एक लंबी तरंग दैर्ध्य पर प्रकाश का उत्सर्जन करता है।
• इस उत्सर्जित प्रकाश का उपयोग नमूने की छवि उत्पन्न करने के लिए किया जाता है।
• विकल्प 1 में दिया गया कथन गलत है क्योंकि प्रतिदीप्ति रंग एक तरंग दैर्ध्य के प्रकाश को अवशोषित करते हैं और एक लंबी तरंग दैर्ध्य के प्रकाश का उत्सर्जन करते हैं, न कि समान तरंग दैर्ध्य का।

विकल्प 2: कोनफोकल (संनाभि) सूक्ष्मदर्शी: सूक्ष्म प्रदीप्ति तथा संसूचन द्वारक का उपयोग

• कोनफोकल सूक्ष्मदर्शी प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी का एक प्रकार है जो उच्च स्थानिक रिज़ॉल्यूशन के साथ नमूने के पतले ऑप्टिकल वर्गों की इमेजिंग की अनुमति देता है।
• यह नमूने में एक बिंदु को रोशन करने के लिए लेजर या प्रकाश के एक बिंदु स्रोत का उपयोग करता है, और डिटेक्टर के सामने एक पिनहोल एपर्चर आउट-ऑफ-फोकस प्रकाश को समाप्त करने के लिए।
• लेजर और पिनहोल एपर्चर को नमूने में स्कैन करके, नमूने की त्रि-आयामी छवि का पुनर्निर्माण किया जा सकता है।
• यह मिलान सही है क्योंकि यह कोनफोकल सूक्ष्मदर्शी के मूल सिद्धांतों का सटीक वर्णन करता है।

विकल्प 4: गैस वर्णलेखिकी: अ-वाष्पशील कार्बोहाइड्रेट अणुओं के विश्लेषण के लिए उपयोग

• गैस वर्णलेखिकी एक प्रकार की वर्णलेखिकी है जो नमूने में वाष्पशील और अर्ध-वाष्पशील यौगिकों को अलग और विश्लेषण करती है।
• गैस वर्णलेखिकी में, नमूने को वाष्पीकृत किया जाता है और एक क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में इंजेक्ट किया जाता है।
• नमूने में यौगिकों को स्थिर चरण (आमतौर पर कॉलम के अंदर एक तरल कोटिंग) और एक मोबाइल चरण (आमतौर पर एक निष्क्रिय गैस) के बीच उनके विभाजन द्वारा अलग किया जाता है।
• अलग किए गए यौगिकों का पता लगाया और मात्रा निर्धारित की जाती है।
• यह गलत है क्योंकि गैस वर्णलेखिकी का उपयोग वाष्पशील और अर्ध-वाष्पशील यौगिकों के विश्लेषण के लिए किया जाता है, न कि अ-वाष्पशील कार्बोहाइड्रेट अणुओं के लिए।

इसलिए, सही उत्तर विकल्प 2 है अर्थात् कोनफोकल सूक्ष्मदर्शी: सटीक रोशनी और संसूचन द्वारक का उपयोग

सही उत्तर A, B, D, F है।

व्याख्या:

कथन A: यह प्रोटीन, पेप्टाइड्स, प्रतिरक्षी और हार्मोन जैसे घुलनशील पदार्थों का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने के लिए एक अत्यधिक संवेदनशील तकनीक है।

• ELISA विभिन्न घुलनशील पदार्थों का पता लगाने और उनकी मात्रा निर्धारित करने में अपनी उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के लिए जाना जाता है। इसका व्यापक रूप से अनुसंधान और नैदानिक निदान में नमूनों में प्रोटीन, पेप्टाइड्स, प्रतिरक्षी और हार्मोन की सांद्रता को मापने के लिए उपयोग किया जाता है।

कथन B: यह एंजाइमों से चिह्नित प्रतिरक्षी का उपयोग करता है जो क्रियाधार जोड़ने पर एक मापनीय उत्पाद उत्पन्न करते हैं।

• ELISA में, प्रतिरक्षी एंजाइमों से संयुग्मित होते हैं। जब एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षी अपने लक्ष्य प्रतिजन से बंध जाता है, और एंजाइम के लिए एक विशिष्ट क्रियाधार जोड़ा जाता है, तो एक उत्प्रेरक अभिक्रिया होती है, जिससे एक पता लगाने योग्य संकेत (अक्सर रंग परिवर्तन) उत्पन्न होता है। यह संकेत प्रतिजन की उपस्थिति और मात्रा को इंगित करता है।

कथन C: इस तकनीक में बंधे और मुक्त प्रतिजन को अलग करने की आवश्यकता नहीं होती है।

• यह कथन गलत है। ELISA में बंधे हुए और मुक्त प्रतिजन को अलग करने के लिए कई धुलाई चरण शामिल हैं। ये धुलाई चरण सुनिश्चित करते हैं कि केवल प्रतिजन-प्रतिरक्षी कॉम्प्लेक्स प्लेट पर रहते हैं, जिन्हें परख के अंतिम चरणों में पता लगाया जाता है।

कथन D: ELISA में रंग परिवर्तन लक्ष्य विश्लेषण की उपस्थिति को इंगित करता है।

• ELISA में रंग (या किसी अन्य पता लगाने योग्य संकेत) का उत्पादन एंजाइम-क्रियाधार अभिक्रिया का प्रत्यक्ष परिणाम है, जो केवल तभी होता है जब एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षी अपने लक्ष्य प्रतिजन से बंध गया हो। इस प्रकार, रंग की उपस्थिति नमूने में लक्ष्य विश्लेषण की उपस्थिति को इंगित करती है।

कथन E: ELISA में मोनोक्लोनल प्रतिरक्षी का उपयोग करना संभव नहीं है।

• यह कथन गलत है। मोनोक्लोनल प्रतिरक्षी, जो कोशिकाओं के एकल क्लोन से प्राप्त प्रतिरक्षी हैं और इस प्रकार संरचना और प्रतिजन विशिष्टता में समान हैं, आमतौर पर ELISA में उपयोग किए जाते हैं। उनकी उच्च विशिष्टता और एकरूपता उन्हें इस तकनीक के लिए आदर्श बनाती है।

कथन F: रंग परिवर्तन की तीव्रता लक्ष्य विश्लेषण की सांद्रता के सीधे आनुपातिक होती है।

• ELISA में, एंजाइम अभिक्रिया एक रंग परिवर्तन उत्पन्न करती है जिसकी तीव्रता स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापी जाती है। उत्पादित रंग की मात्रा नमूने में प्रतिजन की मात्रा के समानुपाती होती है। इसलिए, एक मानक वक्र से रंग की तीव्रता की तुलना करके, लक्ष्य विश्लेषण की सांद्रता को सटीक रूप से निर्धारित किया जा सकता है।

Key Points 

A) जीवाणु समूहन

• इस अनुप्रयोग के लिए, उपयोग किए जाने वाले प्रतिरक्षी का प्रकार एकक्लोनी या बहुक्लोनी होना चाहिए।
• एकक्लोनी और बहुक्लोनी दोनों प्रतिरक्षी का उपयोग जीवाणु कोशिकाओं को एग्लूटिनेट करने के लिए किया जा सकता है।

B) वेस्टर्न ब्लॉटिंग

• इस अनुप्रयोग के लिए, उपयोग किए जाने वाले प्रतिरक्षी का प्रकार आमतौर पर एक बहुक्लोनी प्रतिरक्षी होता है।
• बहुक्लोनी प्रतिरक्षी लक्ष्य प्रोटीन पर कई एपिटोप्स को पहचानते हैं, जिससे वे वेस्टर्न ब्लॉट में प्रोटीन का पता लगाने में अधिक प्रभावी होते हैं।

C) सॉलिड फेज ELISA का उपयोग करके साइटोकिन का पता लगाना

• इस अनुप्रयोग के लिए, उपयोग किए जाने वाले प्रतिरक्षी का प्रकार आमतौर पर एक एकक्लोनी प्रतिरक्षी होता है।
• एकक्लोनी प्रतिरक्षी में बहुक्लोनी प्रतिरक्षी की तुलना में उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता होती है, जिससे वे सॉलिड-फेज ELISA में साइटोकिन का पता लगाने में अधिक प्रभावी होते हैं।

D) नैदानिक ऊतक टाइपिंग

• इस अनुप्रयोग के लिए, उपयोग किए जाने वाले प्रतिरक्षी का प्रकार आमतौर पर एक एकक्लोनी प्रतिरक्षी होता है।
• एकक्लोनी प्रतिरक्षी अत्यधिक विशिष्ट होते हैं और उनका उपयोग निकट से संबंधित ऊतकों या कोशिका प्रकारों के बीच अंतर करने के लिए किया जा सकता है।

संशोधित तालिका:

निष्कर्ष:-

इसलिए, सही उत्तर विकल्प 2 अर्थात [(A - iii); (B - iii); (C - i); (D - I)] है।

अवधारणा:

• एपिफ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी, जिसे वाइड-फील्ड फ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी (WFM) भी कहा जाता है, जीवन विज्ञान में सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली फ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी विधि है।
• फ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी कोशिका आकारिकी, कोशिकीय/उपकोशिकीय खंड के साथ-साथ रोग के कोशिकीय चिह्नक ​(उदाहरण, कैंसर बनाम सामान्य कोशिकाएं) या फीनोटाइप (उदाहरण, स्टेम कोशिका वंश क्रम) के दृश्य में सहायता करती है।

चित्र 1: एपिफ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी का किरण आरेख

• WFM में एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (आमतौर पर पराबैंगनी या नीले, दृश्य स्पेक्ट्रम के हरे क्षेत्रों में) का प्रकाश तरंग दैर्ध्य-चयनात्मक बैंडपास फिल्टर (उत्तेजना फिल्टर) के माध्यम से आर्क-डिस्चार्ज लैंप या अन्य स्रोत से बहुस्पेक्ट्रमी प्रकाश को पारित करके उत्पन्न होता है।
• उत्तेजना फिल्टर द्वारा पारित चयनित तरंगदैर्ध्य तब सूक्ष्म प्रकाश के साथ नमूना को देखने के लिए सूक्ष्मदर्शी वास्तु के माध्यम से एक द्विरंजनी दर्पण या बीम स्प्लिटर से परावर्तित होती हैं।
• यदि नमूना प्रतिदीप्त होता है, तो वस्तु द्वारा एकत्र किया गया उत्सर्जन प्रकाश द्विरंजनी दर्पण के माध्यम से वापस जाता है और बाद में एक अन्य बैंडपास फिल्टर (उत्सर्जन फिल्टर) द्वारा फिल्टर होता है, जो अवांछित उत्तेजना तरंग दैर्ध्य को अवरुद्ध करता है।
• उत्सर्जित प्रकाश को एक संसूचक जैसे CCD कैमरा द्वारा एकत्र किया जाता है।

स्पष्टीकरण:

• फ्लोरोफोरे के एक व्यूह के अनुप्रयोग ने अप्रतिदीप्त ​पदार्थ के बीच उच्च स्तर की विशिष्टता वाले कोशिकाओं और उपकोशिकीय घटकों की पहचान करना संभव बना दिया है।
• बहु-फ्लोरोफोरे लेबलिंग के उपयोग के माध्यम से, विभिन्न जांच एक साथ कई लक्षित अणुओं की पहचान कर सकती हैं।
• प्रति‍रक्षा अभि‍रंजित ​नमूनों की प्रफ्लोरेसेंस सूक्ष्मदर्शिकी निर्धारण के समय कोशिकाद्रव्य में सूक्ष्मनलिकाएं के वितरण की जांच में सहायता करती है।
• आंत, वृक्क, वृषण, पेशियों, यकृत और फेफड़ों सहित मानवों और प्रयोगशाला जंतुओं से प्राप्त अधिकांश सामान्य कोशिका रेखाएँ और स्तनधारी ऊतक खंड, चमकीले रंग के प्रतिदीप्तिशील नमूनों का उत्पादन करते हैं, जो साइटोस्केलेटल नेटवर्क का विवरण देते हैं, जिन्हें एक कॉकटेल के साथ अभिरंजित किया जाता है जिसमें सामान्य कम आणविक भार संश्लिष्ट प्रतिदीप्तिशील जांच के लिए ट्यूबुलिन प्रतिरक्षी और फैलोलाइडिन (या फैलैसिडिन) शामिल होते हैं।
• ट्यूबिलिन (साथ ही एक्टिन) को देखने के लिए उपयोगी प्रतिदीप्तिशील चिह्नक रोडामाइन, फ्लोरेसिन, एलेक्सा फ्लोर सीरीज़ और साइनाइन रंग हैं।

• कोशिकाओं को प्रति‍रक्षा अभि‍रंजन​ रूप से माउस एंटी-अल्फा-ट्यूबुलिन प्राथमिक प्रतिरक्षी के साथ लेबल किया गया था, इसके बाद गॉट एंटी-माउस द्वितीयक प्रतिरक्षी को एलेक्सा फ्लोर 568 से संयुग्मित किया गया था ।
• इसके अलावा, नमूने को एलेक्सा फ्लोर 488 के साथ प्रतिरंजित किया गया था।

अतः, सही उत्तर विकल्प 1 है।

सही उत्तर F(ab’)2 है।

अवधारणा:

• पूरक स्थिरीकरण परीक्षण का उपयोग अक्सर विभिन्न संभावित रोगजनक सूक्ष्मजीवों के विरुद्ध प्रतिरक्षी की जांच के लिए किया जाता है।
• यह परीक्षण विशिष्ट सूक्ष्मजीवीय प्रतिजनों के विरुद्ध ह्यूमरल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (IgM; IgG) को मापता है।
• सीएफ परीक्षण रोगी के सीरम में प्रतिरक्षी का पता लगाता है।
• परीक्षण में भेड़ के आरबीसी, भेड़ के आरबीसी के विरुद्ध प्रतिरक्षी और पूरक के स्रोत के रूप में बिना गरम किए हुए गिनी पिग सीरम का उपयोग किया जाता है।
• प्रतिरक्षी से लेपित आरबीसी से पूरक बंधने पर हेमोलिसिस होता है।
• यह झिल्ली आक्रमण परिसर के निर्माण को ट्रिगर करता है, जिसके परिणामस्वरूप छिद्र बनते हैं।

​​व्याख्या:

• सीएफ परीक्षण में, एक ज्ञात प्रतिजन को गरम किए गए रोगी सीरम में मिलाया जाता है।
• जब सीरम में प्रतिरक्षी मौजूद होती हैं, तो इस प्रतिजन को मिलाने से प्रतिजन-प्रतिरक्षी कॉम्प्लेक्स का निर्माण होता है।
• गिनी पिग पूरक को फिर मिश्रण में मिलाया जाता है और कॉम्प्लेक्स द्वारा इसका उपभोग किया जाता है।
• परिणामी मिश्रण इस प्रकार संवेदनशील भेड़ आरबीसी को लाइस करने में असमर्थ है।
• हेमोलिसिस की कमी एक सकारात्मक CF परीक्षण को इंगित करती है।
• अर्थात IgG कोशिकाओं से बंधा है।

अतिरिक्त जानकारी:

• इम्युनोग्लोबुलिन G(IgG)
• प्रतिरक्षी संरचना को फैब आर्म और Fc स्टेम में विभाजित किया गया है।
  • इम्युनोग्लोबुलिन G(IgG) का Fc भाग पूरक जैसे प्रभावी अणुओं के लिए इंटरैक्शन साइट प्रदान करता है।
    • प्रतिरक्षा प्रणाली में काम करने वाली अधिकांश कोशिकाएं IgG के लिए रिसेप्टर व्यक्त करती हैं, जिसमें इग-फोल्ड डोमेन वाले बाह्य क्षेत्र होते हैं
    • IgG के एफसी भाग के साथ अंतःक्रिया
    • इसलिए, उन्हें सामूहिक रूप से Fcγ रिसेप्टर (FcγRs) कहा जाता है।
  • ​​F(ab) टुकड़ा एक प्रतिरक्षी संरचना है जो अभी भी प्रतिजनों से बंधती है लेकिन एफसी भाग के बिना मोनोवैलेंट है।
    • पेप्सिन एंजाइम द्वारा पचाए गए प्रतिरक्षी से लगभग 50 kDa के दो F(ab) टुकड़े और एक Fc टुकड़ा प्राप्त होता है।
  • F(ab')2 टुकड़ा प्रतिरक्षी पूरे IgG प्रतिरक्षी के पेप्सिन पाचन द्वारा उत्पन्न होते हैं (एफसी क्षेत्र के अधिकांश भाग को हटाने के लिए।
    • जबकि कुछ हिंग क्षेत्रों को बरकरार रखा जाता है। F(ab')2 टुकड़ों में दो एंटीजन-बाइंडिंग F(ab) भाग होते हैं जो डाइसल्फ़ाइड बंधों द्वारा एक साथ जुड़े होते हैं
    • इसलिए लगभग 110 kDa के आणविक भार के साथ द्विसंयोजक होते हैं।
    • परीक्षण परिणाम के अनुसार, नली 1 में तैयारी SRBCs को एकत्रित कर सकती है लेकिन पूरक की उपस्थिति में उन्हें लाइस नहीं कर सकती है। यह इंगित करता है कि इस नली में अंश में Fc भाग नहीं है लेकिन एकत्रीकरण का कारण बनने के लिए द्विसंयोजक होना चाहिए। इसलिए, नली 1 में तैयारी F(ab) 2 अंश होनी चाहिए।

इसलिए, सही उत्तर विकल्प 3 है अर्थात F(ab’)2.

अवधारणा:

• विडाल परीक्षण का उपयोग नैदानिक प्रयोगशालाओं में आंतरिक बुखार (टाइफाइडल या पैराटाइफाइडल बुखार) के सीरोलॉजिकल निदान के लिए व्यापक रूप से किया जाता है।
• साल्मोनेला टाइफी के O और H प्रतिजन तथा साल्मोनेला पैराटाइफी के A, B, और C प्रतिजन इस परख के लक्ष्य हैं, जो सीरम प्रतिरक्षी के स्तर का आकलन करते हैं।
• O और H प्रतिजन क्रमशः साल्मोनेला टाइफी में कोशिका भित्ति और कशाभिका पर मौजूद होते हैं।
• जबकि AH और BH प्रतिजन साल्मोनेला पैराटाइफी के फ्लैजिला पर मौजूद होते हैं।
• इस परीक्षण में, साल्मोनेला पैराटाइफी के O प्रतिजन का उपयोग नहीं किया जाता है क्योंकि वे साल्मोनेला टाइफी के O प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं ।
• ये प्रतिजन प्रतिरक्षाजनक होते हैं, जिसका अर्थ है कि जब वे पोषी के प्रतिरक्षा तंत्र के समक्ष प्रस्तुत किये जाते हैं, तो वे विशेष प्रतिरक्षी का विकास करते हैं।
• साल्मोनेला प्रतिरक्षी का सीरम स्तर पहले सप्ताह के अंत में दिखना शुरू होता है और स्थानिक बुखार के तीसरे सप्ताह के दौरान तेजी से बढ़ता है। तीव्र टाइफाइड बुखार में O एग्लूटीनिन आमतौर पर बीमारी की शुरुआत के 6-8 दिन बाद और H एग्लूटीनिन 10-12 दिन बाद देखा जा सकता है।
• बढ़ते प्रतिरक्षी टाइटर को दिखाने के लिए, 7-10 दिनों के अंतराल पर दो सीरा नमूनों का विश्लेषण करना उचित है।
• स्लाइड और ट्यूब प्रक्रिया को साल्मोनेला प्रतिजन निलंबन के साथ नियोजित किया जा सकता है।

स्पष्टीकरण:

विकल्प 1 : अवक्षेपण परीक्षण

• अवक्षेपण एक अभिक्रिया है जो विलयन में उपस्थित आयनों (आयनिक यौगिकों) के बीच रासायनिक अभिक्रिया से अघुलनशील ठोस द्रव्य के निर्माण की ओर ले जाती है।
• विडाल परीक्षण में, अघुलनशील ठोस मोआ आयन प्रतिक्रिया का परिणाम नहीं हैं।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

विकल्प 2 : एग्लूटिनेशन परीक्षण

• समूहन एक अभिक्रिया है जो विलयन में निलंबित कणों के एकत्रीकरण से ठोस द्रव्य के निर्माण की ओर ले जाती है।
• विडाल परीक्षण में, निलंबित कण प्रतिजन और प्रतिरक्षी होते हैं जो ठोस पदार्थ के निर्माण का कारण बनते हैं।
• अतः यह सही विकल्प है।

विकल्प 3 : पूरक स्थिरीकरण परीक्षण

• पूरक स्थिरीकरण परीक्षण, परीक्षण नमूने में उपस्थित Ag-Ab कॉम्प्लेक्स को निर्धारित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले सबसे महत्वपूर्ण परीक्षणों में से एक है।
• पूरक अणु अकेले प्रतिजन या प्रतिरक्षी से बंध नहीं सकते, वे केवल Ag-Ab कॉम्प्लेक्स से ही बंध सकते हैं। एक बार, यह कॉम्प्लेक्स से बंध जाता है, पूरक स्थिर हो जाता है और आगे की प्रतिक्रिया शुरू हो जाती है।
• विडाल परीक्षण में, हम Ag-Ab कॉम्प्लेक्स से जुड़ने के लिए किसी पूरक का उपयोग नहीं करते हैं।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

विकल्प 4: प्रतिरक्षाप्रतिदीप्ति संसूचन

• इम्यूनोफ्लोरेसेंस एक महत्वपूर्ण इम्यूनोकेमिकल तकनीक है जो विभिन्न कोशिका निर्माण के ऊतकों में प्रतिजन के स्थानीयकरण और पता लगाने की अनुमति देती है।
• इस प्रक्रिया में प्रतिरक्षी को फ्लोरोफोरस के साथ टैग किया जाता है।
• विडाल परीक्षण में, प्रतिजन का पता लगाने के लिए फ्लोरोफोर प्रतिरक्षी का उपयोग नहीं किया जाता है।
• इसलिए, यह एक गलत विकल्प है।

अतः सही उत्तर विकल्प 2 अर्थात समूहन अभिक्रिया है।

सही उत्तर एलेक्सा 488 (C) और Cy5 (D) है।

अवधारणा:

फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी कोशिका आकारिकी, कोशिकीय/उपकोशिकीय डिब्बों के साथ-साथ रोग (जैसे, कैंसर बनाम सामान्य कोशिकाएँ) या फेनोटाइप (जैसे, स्टेम सेल वंश) के कोशिकीय चिन्हकों की कल्पना करने में सहायता करता है।

• वाइड-फील्ड फ्लोरोसेंस माइक्रोस्कोपी (WFM) में एक विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (आमतौर पर पराबैंगनी या दृश्यमान स्पेक्ट्रम के नीले, हरे क्षेत्रों में) का प्रकाश एक आर्क-डिस्चार्ज लैंप या अन्य स्रोत से बहु-स्पेक्ट्रल प्रकाश को एक तरंग दैर्ध्य-चयनात्मक बैंडपास फ़िल्टर (उत्तेजना फ़िल्टर) से गुजारकर उत्पन्न होता है।
• उत्तेजना फ़िल्टर द्वारा पारित चयनित तरंग दैर्ध्य को तब एक डाइक्रोमैटिक मिरर या बीम स्प्लिटर से परावर्तित किया जाता है, जो नमूने को तीव्र प्रकाश के साथ उजागर करने के लिए माइक्रोस्कोप ऑब्जेक्ट के माध्यम से गुजरता है।
• यदि नमूना फ्लोरोसेंस करता है, तो ऑब्जेक्ट द्वारा एकत्रित उत्सर्जन प्रकाश डाइक्रोमैटिक मिरर के माध्यम से वापस गुजरता है और बाद में एक अन्य बैंडपास फ़िल्टर (उत्सर्जन फ़िल्टर) द्वारा फ़िल्टर किया जाता है, जो अवांछित उत्तेजना तरंग दैर्ध्य को अवरुद्ध करता है।
• उत्सर्जित प्रकाश को तब एक डिटेक्टर जैसे CCD कैमरे द्वारा एकत्र किया जाता है।

व्याख्या:

कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप में सह-स्थानीयकरण का निरीक्षण करने के लिए, शोधकर्ता को अलग-अलग तरंगदैर्घ्य पर प्रकाश उत्सर्जित करने वाले फ्लोरोफोर का चयन करने की आवश्यकता होती है, यह सुनिश्चित करते हुए कि उनके उत्सर्जन स्पेक्ट्रम में बहुत अधिक ओवरलैप न हो। इससे दोनों प्रोटीनों का स्पष्ट विभेदन और एक साथ इमेजिंग संभव हो पाती है।

A. एलेक्सा 594 - लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~590 nm, उत्सर्जन शिखर ~617 nm)
B. TRITC - लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~557 nm, उत्सर्जन शिखर ~576 nm)
C. एलेक्सा 488 - हरे फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~488 nm, उत्सर्जन शिखर ~519 nm)
D. Cy5 - दूर-लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है (उत्तेजना शिखर ~649 nm, उत्सर्जन शिखर ~670 nm)

• एलेक्सा 488: लगभग 519 nm के उत्सर्जन शिखर के साथ हरे फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है। यह स्पेक्ट्रम के हरे क्षेत्र में अच्छी तरह से आता है।
• Cy5: लगभग 670 nm के उत्सर्जन शिखर के साथ दूर-लाल फ्लोरोसेंस का उत्सर्जन करता है। यह स्पेक्ट्रम के लाल क्षेत्र में बहुत दूर है, लगभग दृश्य प्रकाश सीमा के किनारे पर।

इन फ्लोरोफोर्स में उत्सर्जन शिखर अच्छी तरह से अलग होते हैं, एलेक्सा 488 हरे रंग की सीमा में और Cy5 दूर-लाल सीमा में। उनके उत्सर्जन स्पेक्ट्रा में यह महत्वपूर्ण पृथक्करण ओवरलैप की संभावना को कम करता है, जिससे दोनों प्रोटीनों की स्पष्ट और अलग इमेजिंग संभव हो पाती है।